KEIris RT mix with dsDNase（All-in-One）是將 RNA 合成cDNA 的一個(gè)操作更為簡(jiǎn)便的系統(tǒng)，含有第一鏈 cDNA 合成所需的全部試劑，僅需加入 RNA 模板和水即可進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，操作非常方便。使用該逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液 15 分鐘內(nèi)最長(zhǎng)可獲得12 kb 大小的cDNA。合成的cDNA 推薦用于qPCR 反應(yīng)。該預(yù)混液采用特制的高效 dsDNase，該酶具有熱敏感性， 可在高溫條件下快速不可逆地失活，因此僅需一次加樣，即可同管進(jìn)行去除基因組 DNA 污染與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，與使用DNase I 去除基因組 DNA 污染相比，無(wú)需額外加入 EDTA 進(jìn)行失活，不僅減少了對(duì) RNA 模板的損傷、降低 RNase 污染風(fēng)險(xiǎn)，而且節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

注意事項(xiàng)

1. RNA 模板的純度和完整性是影響逆轉(zhuǎn)錄效果的重要因素， 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等雜質(zhì)會(huì)使 RNA 降解。

2. 若后續(xù)實(shí)驗(yàn)為 qPCR，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過(guò) PCR 體系終體積的 1/10，如 20 μL 的 PCR 反應(yīng)體系，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過(guò) 2 μL。

3. 預(yù)混液中已經(jīng)包含 Oligo(dT)₂₀VN 和隨機(jī)引物，不僅適用于包含 Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物 mRNA，也適用于不含Poly(A)結(jié)構(gòu)的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不適用于 miRNA 等小 RNA 模板。